1. 首頁 > 生活百科 > >

瓊脂糖凝膠電泳，瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA

生活百科

大家好，關于瓊脂糖凝膠電泳很多朋友都還不太明白，不知道是什么意思，那么今天我就來為大家分享一下關于瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的相關知識，文章篇幅可能較長，還望大家耐心閱讀，希望本篇文章對各位有所幫助！
1瓊脂糖凝膠電泳的原理是什么?原理如下：
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質的一種電泳 ***。其分析原理與其他支持物電泳最主要區別是：它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用 。
瓊脂糖凝膠具有 *** 結構，物質分子通過時會受到阻力，大分子物質在涌動時受到的阻力大，因此在凝膠電泳中，帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量，而且還取決于分子大小，這就大大提高了分辨能力 。
但由于其孔徑相比于蛋白質太大，對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道，現廣泛應用于核酸的研究中 。
目前多用瓊脂糖為電泳支持物進行平板電泳，其優點如下：
(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，樣品不需事先處理就可以進行電泳 。
(2)瓊脂糖凝膠結構均勻，含水量大（約占98%~99%)，近似自由電泳，樣品擴散較自由電流，對樣品吸附極微，因此電泳圖譜清晰，分辨率高，重復性好 。
(3)瓊脂糖透明無紫外吸收，電泳過程和結果可直接用紫外光燈檢測及定量測定 。
(4)電泳后區帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測定 。制成干膜可長期保存 。
以上內容參考：百度百科-瓊脂糖凝膠電泳
2瓊脂糖凝膠電泳的原理什么瓊脂糖凝膠電泳的原理：瓊脂糖凝膠電泳是常用的用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物的 *** ，這種電泳 *** 以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在泳動時的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的 。
DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中向陽極移動 。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即分子本身的大小和構型是主要的影響因素 。DNA分子的遷移速度與其相對分子量成反比 。
不同構型的DNA分子的遷移速度不同 。如環形DNA分子樣品，其中有三種構型的分子：共價閉合環狀的超螺旋分子（cccDNA）、開環分子(ocDNA)、和線形DNA分子(IDNA) 。這三種不同構型分子進行電泳時的遷移速度大小順序為:cccDNA＞IDNA＞ocDNA
核酸分子是兩性解離分子，pH3.5是堿基上的氨基解離，而三個磷酸基團中只有一個磷酸解離，所以分子帶正電，在電場中向負極泳動；而?pH8.0-8.3時，堿基幾乎不解離，而磷酸基團解離，所以核酸分子帶負電，在電場中向正極泳動 。
不同的核酸分子的電荷密度大致相同，因此對泳動速度影響不大 。在中性或堿性時，單鏈DNA與等長的雙鏈DNA的泳動率大致相同 。
擴展資料
影響核酸分子泳動率的因素
1、樣品的物理性狀
即分子的大小、電荷數、顆粒形狀和空間構型 。一般而言，電荷密度愈大，泳動率越大 。但是不同核酸分子的電荷密度大致相同，所以對泳動率的影響不明顯 。
對線形分子來說，分子量的常用對數與泳動率成反比，用此標準樣品電泳并測定其泳動率，然后進行DNA分子長度（bp）的負對數——泳動距離作標準曲線圖，可以用于測定未知分子的長度大小 。
DNA分子的空間構型對泳動率的影響很大，比如質粒分子，泳動率的大小順序為：cDNA＞IDNA＞ocDNA但是由于瓊脂糖濃度、電場強度、離子強度和溴化乙錠等的影響，會出現相反的情況 。
2、支持物介質
核酸電泳通常使用瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠兩種介質，瓊脂糖是一種聚合鏈線性分子 。含有不同濃度的瓊脂糖的凝膠構成的分子篩的網孔大小不同，是于分離不同濃度范圍的核酸分子 。聚丙烯酰胺凝膠由丙烯酰胺（Acr）在N,N,N′-四甲基乙四胺（TEMED）和過 *** 銨（AP）的催化下聚合形成長鏈，并通過交聯劑N,N′-亞甲雙丙烯酰胺（Bis）交叉連接而成，其網孔的大小由Acr與Bis的相對比例決定 。
瓊脂糖凝膠適合分離長度100至60的分子，而聚丙烯酰胺凝膠對于小片段（5bp-500bp）的分離效果更好 。選擇不同濃度的凝膠，可以分離不同大小范圍的DNA分子 。
3、電場強度
電場強度愈大，帶點顆粒的泳動越快 。但凝膠的有效分離范圍隨著電壓增大而減小，所以電泳時一般采用低電壓，不超過4V/cm 。而對于大片段電泳，甚至用0.5-1.0V/cm電泳過夜 。進行高壓電泳時，只能使用聚丙烯酰胺凝膠 。
4、緩沖液離子強度
核酸電泳常采用TAE、?TBE、TPE三種緩沖系統，但它們各有利弊 。TAE價格低廉，但緩沖能力低，必須進行兩極緩沖液的循環 。TPE在進行DNA回收時，會使DNA污染磷酸鹽，影響后續反應 。所以多采用TBE緩沖液 。

推薦閱讀