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雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是什么?

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雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是什么?

文章插圖
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲，由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發生雙縮脲反應 。
在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結合形成復雜的紫好色復合物 。而蛋白質及多肽的肽鍵與雙縮脲的結構類似，也能與Cu2+形成紫紅色絡合物，其最大光吸收在540nm處 。其顏色深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸的組成無關，該法測定蛋白質的濃度范圍適于1~10mg /mL 。雙縮脲法常用于蛋白質的快速測定 。
雙縮脲試劑檢測注意事項
【雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是什么?】在使用雙縮脲試劑時候，必須注意，必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液 。
若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無法充分制造堿性環境，此時CuSO4會與NaOH發生復分解反應，生成藍色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉淀，導致現象不清，無法較好地達到實驗目的 。
以上內容參考百度百科-雙縮脲試劑
蛋白質的肽鍵與雙縮尿類似，可與銅離子在堿性環境下(雙縮尿試劑)生成紫色絡合物.稀氫氧化銅溶液(斐林試劑)有弱氧化性可與還原性糖中的醛基發生反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀 。
雙縮脲試劑是一種用于鑒定蛋白質的分析化學試劑 。它是一種堿性的含銅試液，呈藍色，由0.1 g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01 g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制而成 。
擴展資料
雙縮脲反應主要涉及肽鍵，因此受蛋白質特異性影響較小 。且使用試劑價廉易得，操作簡便，可測定的范圍為1～10mg蛋白質，適于精度要求不太高的蛋白質含量的測定，能測出的蛋白質含量須在約0.5mg以上 。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm 。
雙縮脲法的缺點是精確度低、所需樣品量大 。干擾此測定的物質包括在性質上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉淀 。
參考資料來源：百度百科-雙縮脲試劑
紫色絡合物分子結構式在堿性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NOC－NH－CONH2）能與銅離子（Cu2+）作用，形成紫色絡合物（該物質的分子結構式見圖），該反應即雙縮脲反應 。
雙縮脲反應是肽和蛋白質所特有的，而為氨基酸所沒有的一種顏色反應 。一般分子中含有兩個氨基甲酪基（即肽鍵：-CO-NH-）的化合物與堿性
銅溶液作用，就會形成紫色或藍紫色絡合物 。
注：除-CO-NH-有此反應外，（-CONH2-）、（-CH2-）、（-NH2-）、（-CS-CS-NH2）等基團亦有此反應 。

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