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pcr原理是什么？

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pcr原理是什么？

文章插圖
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物 。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑 。
雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子拷貝 。
在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈 。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制 。
擴展資料：
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克（pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平 。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU；在細菌學中最小檢出率為3個細菌 。
引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的 。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合（復性）可以在較高的溫度下進行 。
結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度 。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高 。
【pcr原理是什么？】PCR技術原理是：先將含有所需擴增分析序列的靶DNA雙鏈經熱變性處理解開為兩個寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對根據已知DNA序列由人工合成的與所擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物 。
此引物范圍就在包括所欲擴增的DNA片段，一般需20－30個堿基對，過少則難保持與DNA單鏈的結合 。引物與互補DNA結合后，以靶DNA單鏈為模板，經反鏈雜交復性（退火） 。
在TaqDNA聚合酶的作用下以4種三磷酸脫氧核苷（dNTP）為原料按5＇到3＇方向將引物延伸、自動合成新的DNA鏈、使DNA重新復制成雙鏈 。然后又開始第二次循環擴增 。
擴展資料：
PCR技術由Cetus公司和加利福尼亞大學1985年聯合創造的，主要貢獻者為KaryBmulis和HeneryA、Erlich 。該方法首先被應用于人β－珠蛋白DNA的擴增及鐮刀狀紅細胞貧血病的產前診斷 。
自85年首次報道PCR方法以來，PCR被廣泛應用于分子克隆、序列分析、基因突變、遺傳病、傳染病、性傳播性疾病及法醫判定和考古研究等多領域、并發揮了越來越大的作用 。因而發明人KaryB、mulis獲1993年諾貝爾化學獎 。
參考資料來源：百度百科-基因擴增技術
PCR原理是生物學的聚合酶鏈反應 。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物 。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈 。
pcr反應特點：
1.特異性強 。
引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的 。聚合酶合成反應的忠實性及TaqDNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結合（復性）可以在較高的溫度下進行，結合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度 。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區，其特異性程度就更高 。
2.靈敏度高 。
PCR產物的生成量是以指數方式增加的，能將皮克（pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平 。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位）；在細菌學中最小檢出率為3個細菌 。
3.簡便快速 。
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性－退火－延伸反應，一般在2～4小時完成擴增反應 。擴增產物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣 。
4.純度要求低 。
不需要分離病毒或細菌及培養細胞，DNA粗制品及RNA均可作為擴增模板 ?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活組織等DNA擴增檢測 。
以上內容參考：百度百科-聚合酶鏈式反應

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