高效液相色譜儀,高效液相色譜儀型號廠家( 三 )


3、色譜柱的清洗 。
為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應及時地清洗色譜柱 。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質是極性大的物質,此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可 。如果流動相是緩沖溶液,則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗 。
凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相,用完之后當然要用蒸餾水來沖洗 。如果是連續操作,可以將緩沖溶液置于柱內過夜,但更好是維持小流速(<0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出,如果流動相中含有鹵化物,即使是停一夜,也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈,以防止它們對柱體的腐蝕 。
4、色譜柱的存放 。
如果色譜柱暫時不用,存放時要注意以下幾點:
a.幾天之內的短期放置,應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗),再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可 。
b.如果色譜柱長期不用,僅用上述 *** 來處理就不行了,這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱則可用正已烷或庚烷,而凝膠柱則不能用水了,因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低,此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴 。色譜柱長期放置時,一定要將色譜柱的兩端封嚴,以防止由于溶劑揮發而造成的柱填料干縮現象,因這可導致柱效的嚴重降低 。
c.色譜柱應貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環境里,柱內就會結冰,這也將導致柱效的降低 。
高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀(HPLC)一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成 。制備型儀器還需配有餾份收集系統 。為了取得較好的分析結果,HPLC 儀器對于準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求 。
高效液相色譜儀的工作原理
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來 。
擴展資料:
高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀(HPLC)一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成 。制備型儀器還需配有餾份收集系統 。為了取得較好的分析結果,HPLC 儀器對于準確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求 。
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高壓輸液系統
高壓輸液系統包括:溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置 。其中,高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一,輸送壓力達150—350×105Pa 。輸液系統要為HPLC儀器提供流量恒定、準確、無脈沖的流動相,流量的精度和長期的重復性要好,同時還要提供精度好、準確度高、重現性好的多元溶劑梯度 。因此,輸液泵的好壞直接影響著整個系統的質量和分析結果的可靠性 。
進樣系統:進樣能在試樣引入色譜柱,有六個接口:1,4之間接定量環;2接高壓泵;3接色譜柱;5,6接廢液管 。
色譜分離系統:色譜柱通常為不銹鋼柱,內裝各種填充劑 。常用的填料為硅膠,可用于正相色譜;化學鍵合固定相,根據鍵合的基團不同,可用于反相或正相色譜 。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠,即ODS柱,可用于反相色譜或離子對色譜 。
檢測系統:檢測系統用于連續檢測色譜柱流出的物質,進行定性定量分析 。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩定、響應值的線性范圍寬等 。近年來各國都在研究開發新的檢測技術,進一步擴大了HPLC的應用 。
根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(UVD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ECD)、紅外檢測器(IRD)、核磁共振檢測器(NMRD)、質譜檢測器(MSD)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、小角度激光散射檢測器(LALLSPD) 。
數據處理系統:高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪制譜圖外,還可使用微處理機和色譜數據工作站來記錄和處理色譜分析的數據 。

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