婦科pcr檢查是什么意思,pcr檢查是什么意思( 四 )


靈敏度高 PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平 。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌 。
簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應 。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣 。
對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板 ??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活組織等粗制的DNA擴增檢測 。PCR擴增產物分析
PCR產物是否為特異性擴增 ,其結果是否準確可靠,必須對其進行嚴格的分析與鑒定,才能得出正確的結論 。PCR產物的分析,可依據研究對象和目的不同而采用不同的分析 ***。
凝膠電泳分析:PCR產物電泳,EB溴乙錠染色紫外儀下觀察,初步判斷產物的特異性 。PCR產物片段的大小應與預計的一致,特別是多重PCR,應用多對引物,其產物片斷都應符合預訐的大小,這是起碼條件 。
瓊脂糖凝膠電泳: 通常應用1~2%的瓊脂糖凝膠,供檢測用 。
聚丙烯酰胺凝膠電泳:6~10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離效果比瓊脂糖好,條帶比較集中,可用于科研及檢測分析 。
酶切分析:根據PCR產物中限制性內切酶的位點,用相應的酶切、電泳分離后,獲得符合理論的片段,此法既能進行產物的鑒定,又能對靶基因分型,還能進行變異性研究 。
分子雜交:分子雜交是檢測PCR產物特異性的有力證據,也是檢測PCR 產物堿基突變的有效 ***。
Southern印跡雜交: 在兩引物之間另合成一條寡核苷酸鏈(內部寡核苷酸)標記后做探針,與PCR產物雜交 。此法既可作特異性鑒定,又可以提高檢測PCR產物的靈敏度,還可知其分子量及條帶形狀,主要用于科研 。
斑點雜交: 將PCR產物點在硝酸纖維素膜或尼膜薄膜上,再用內部寡核苷酸探針雜交,觀察有無著色斑點,主要用于PCR產物特異性鑒定及變異分析 。
核酸序列分析:是檢測PCR產物特異性的最可
5pcr檢查是什么聚合酶鏈式反應,簡稱PCR 。其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種 *** ,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點 。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病病的診斷或任何有 DNA,RNA的地方.聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,簡稱PCR)又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術 。由美國科學家PE(Perkin Elmer珀金-埃爾默)公司遺傳部的Dr. Mullis發明,由于PCRPCR技術在理論和應用上的跨時代意義,因此Mullis獲得了1993年諾貝爾化學獎 。
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑 。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝 。在實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈 。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制
簡略點,就是運用專門儀器,使用dNTPS、Mg2+、特異引物、DNA聚合酶以及緩沖體系,加入模板也就是DNA樣品進行體外擴增,結果進行電泳,如果能擴增出,并且擴增的產物大小與目的條帶一致,那說明引物與模板特異,檢測指標就是陽性 。
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