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三葉青的組織培養與快速繁殖研究

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三葉青又名有角烏蘞莓、石老鼠，為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤 。主要分布于長江以南地區，但多年來三葉青被毀滅性挖取，種源稀少 。筆者應用組織培養進行快速繁殖研究，以期解決資源緊缺問題 。1材料 。1.1藥材：試驗材料采自安徽省，外植體取莖尖、帶腋芽的莖段和葉片 。1.2培養基：基本培養基為MS按不同處理方案添加不同類型的植物激素，用0.1NNaOH和0.1NHCL調節pH值為5.8~6.0，在高壓滅菌鍋中高溫（121℃）滅菌20min 。上述培養基均加3％蔗糖、1％瓊脂，培養室溫度25℃左右，每天光照13h，光照強度20001x左右 。移栽基質經過滅菌消毒處理，按m（珍珠巖）：m（草炭）：m（菜園土）=1∶1∶1比例混合 。2試驗方法與結果 。2.1樣品處理：取莖尖、莖段（帶芽）和葉為外植體，按下列程序進行消毒：選材→自來水粗洗→用5%洗衣粉水溶液漂洗5 min →用自來水漂洗30 min →用75%乙醇擦洗表面→用0.1%氯化汞溶液消毒5min→用2%次氯酸鈉溶液消毒20min→用無菌水漂洗4~6次，然后將外植體在無菌工作臺上切成長度為0.5~1.0cm的小塊 。2.2芽誘導培養:將不同部位的外植體接種到表1的各培養基中，觀察出芽情況，計算芽誘導率 。不同外植體愈傷組織誘導不同，試驗結果如下:3號培養基激素濃度配比(見表2) 。2.3繼代增殖:將誘導的愈傷組織和芽簇轉移到含有三種不同激素組合的新培養基中進行繼代培養 。將原代培養的芽簇分離切割成2厘米的莖段，接種到MS+NAA0.2培養基中；；MS+6-BA0.02+NAA 0.5；MS+6-BA2+NAA 0.2 .接種后，在20~28℃的室溫下進行全天光照 。一周后，腋芽萌發，萌發的分蘗迅速生長 。2.4生根培養:不同激素組合對其生根狀況影響較大(表4) 。將誘導的存活叢生芽切成單芽，然后轉移到表3中的每種培養基中(每瓶一個芽) 。30天后，4號培養基生根率高達74% 。2.5移栽定植:待芽長到3 ~ 4厘米時，將健康植株剪掉，轉移到生根培養基中，所有植株都能正常生長 。培養1周后，可以誘導根 。10天后，每株可長出3 ~ 5根，長4 ~ 5厘米 。再培育一周，植株健壯，葉片深綠色，然后揭去紙蓋，練苗 。輕輕洗去根部培養基，移至蛭石小盆中，蓋上塑料薄膜和燒杯，高溫保存，10天后揭去塑料薄膜和燒杯，移栽到田間 。苗木成活率達95% 。3概述 。
誘導白三葉不同部位的外植體 。在相同的消毒處理和相同的培養基下，最佳外植體為莖尖 。在原代培養過程中，3號培養基最好，4號培養基生根最好 。BA三葉草在繼代培養中的作用可以忽略，可以認為MS+NAA0.2是最佳的繼代培養基 。
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