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什么是核酸分子雜交 核酸雜交

核酸分子

核酸雜交(什么是核酸分子雜交)
一、分子雜交的原理
分子雜交是一種核酸和蛋白質的分析方法 ， 用于檢測混合樣品中特定核酸分子或蛋白質分子的存在及其相對含量 。其基本原理是待檢測的單鏈核酸或蛋白質分子與已知序列的單鏈核酸或抗體(稱為探針)通過堿基配對或免疫反應形成可檢測信號 。在分子雜交過程中 ， 核心是印跡轉移技術 ， 先在凝膠上分離DNA、RNA和蛋白質 ， 使相對分子量不同的分子鋪展在凝膠上 ， 再將凝膠上的樣品通過影印的方式轉移到固相支持物上 。經過這個印跡過程 ， 標記的探針或抗體與濾膜上的核酸或蛋白質分子雜交 ， 從而判斷樣品中是否存在與該探針同源的核酸分子或與抗體反應的蛋白質分子 ， 并猜測相對分子量 。
二、分子雜交的發展過程
【什么是核酸分子雜交 核酸雜交】核酸雜交技術是Hall等人在1961年研究的 。該方法的原理是探針與溶液中的靶序列雜交 ， 通過平衡密度梯度離心分離雜交體 ， 檢測靶序列的含量 。這種方法費時、費力、不準確 ， 但發展了核酸雜交技術的研究 。20世紀60年代中期 ， 尼加德等人的研究為應用標記的DNA或RNA探針檢測固定在硝酸纖維素(NC)膜上的DNA序列奠定了基礎 。20世紀70年代 ， 分子生物學技術取得了突破 。固定化的聚U-Sepharose和寡(dT)-纖維素使人們能夠從總RNA中分離出聚A+mRNA ， 這可用于檢測mRNA的表達 。限制性內切酶的發展和應用使分子克隆成為可能 。各種載體系統的誕生 ， 特別是質粒和噬菌體載體的構建 ， 豐富了特異性DNA探針的來源 。人們可以從基因組DNA文庫和c DNA文庫中獲得特定的基因克隆 ， 僅僅通過培養細菌就可以提取大量的探針DNA 。目前 ， 核酸雜交技術在用非放射性物質代替放射性同位素標記探針、簡化實驗操作、縮短雜交時間等方面取得了很大進步 ， 使得核酸雜交技術越來越簡單、快速、廉價、安全 。將電泳分離的蛋白質組分轉移到固定膜上 ， 即Western blot(即蛋白質印跡) 。1979年由四個研究小組(Houvet D ， Renart J ， Erlich H ， Towbin H)首次報道 ， 但現在Towbin H等人使用的方法被廣泛使用 。這種方法實際上是在1975年由Southern DNA印跡法發展而來的 。因此 ， Western雜交并不是真正的分子雜交 ， 而是檢測濾膜上是否存在抗體探針識別的蛋白質的免疫反應 。
三.分子雜交的類型
根據檢測的對象 ， 分子雜交可以分為以下幾類 。(1)Southern印跡:電泳分離DNA片段 ， 從凝膠轉移到硝酸纖維素濾膜或尼龍膜上 ， 然后與探針雜交 。檢測的對象是DNA ， 探針是DNA 。

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